单细胞测序技术服务 靶向单细胞测序(lncRNA&mRNA) 单细胞测序 |
生物分子凝聚体研究 HyPro靶RNA临近标记技术 |
NGS测序技术服务 R-loop 测序(DRIPc-seq) |
NGS测序技术服务 环状DNA测序(eccDNA测序) |
Ribo-seq Ribo seq(ribosome profiling) |
核糖体-新生肽链复合物(RNC) RNC联合 circRNA芯片 RNC联合 lncRNA芯片 RNC-seq |
蛋白表达定量 Label free非标定量 TMT标记定量 PRM靶向定量 |
正交有机相分离(Orthogonal Organic Phase Separation, OOPS)是一种基于硫氰酸胍-酚-氯仿相分离原理的实验技术,可在全基因组范围内高效挖掘“RNA-蛋白质”相互作用信息。与传统的RNA pull-down或免疫沉淀技术相比,OOPS不再把某一靶RNA或某一靶蛋白作为研究起点,而是把细胞内所有“RNA-蛋白”互作复合物通过相分离富集下来。OOPS结合质谱,可以对互作组中的所有蛋白进行检测;OOPS结合RNA测序或芯片,可以对互作组中的所有RNA进行检测。OOPS能够全面捕获机体在不同状态下RNA-蛋白互作信息的变化,为疾病机制的解析、生长发育及细胞功能调控等生物学过程的研究提供全新的视角和工具(图 1)。
图 2 OOPS实验流程图
OOPS Seq / OOPS 芯片实验的标准技术路线:
紫外交联:紫外线(254 nm)照射细胞或组织样本,将RNA与其结合蛋白共价交联,可固定其相互作用;
细胞裂解和相分离:在变性条件下裂解样本,可最大程度维持复合物的完整性。有机相(酚-氯仿)与水相分离后,游离的RNA进入水相,游离的蛋白进入有机相,交联的“RNA-蛋白质”复合物则分布于两相的中间层;
“RNA-蛋白质”复合物的回收与酶解:收集中间层分布的“RNA-蛋白质”复合物;
RNA分离:用蛋白酶消化蛋白,释放和纯化蛋白质结合的RNA;
下游分析:
RNA测序/芯片:建库和测序/芯片分析互作组中RNA分子的种类和量的变化。