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核糖体-新生肽链复合物(RNC) RNC联合 circRNA芯片 RNC联合 lncRNA芯片 RNC-seq |
蛋白表达定量 Label free非标定量 TMT标记定量 PRM靶向定量 |
rtStar™ tRF&tiRNA预处理试剂盒用于qPCR的cDNA合成之前的tRF & tiRNA样品制备。该试剂盒通过去除tRF和tiRNA片段中经常存在的3’环磷酸和5’羟基,产生了可以连接接头的3’羟基和5’磷酸末端。tRF和tiRNA片段内部的 m1A、m1G 和 m3C修饰也被去甲基化以实现高效的 cDNA 逆转录。
rtStar™ tRF&tiRNA第一链cDNA合成试剂盒将预处理的 tRF 和 tiRNA 片段转化为用于 qPCR 反应的 cDNA。 该方法依次将 3'-Adaptor 连接到 RNA 的 3'-末端,将 5'-Adaptor 连接到 RNA 的 5'-末端。
产品优势
•有效去除内部修饰以确保 cDNA 合成过程中逆转录酶的顺利进行,解除修饰对常规cDNA合成的影响
•进行末端修复,以保证产生适合连接接头的3’羟基和5’磷酸末端
•有效区分tRF&tiRNAs和其前体
•与未处理的样本相比,预处理极大地增加了tRF&tiRNA检测的灵敏度、定量精确性和检出区分度
本试剂盒建议与nrStar™ tRF&tiRNA PCR芯片或rtStar™ Pre-designed tRF&tiRNA Primer Sets搭配使用,不建议用于其他研究使用。
产品名称 | 货号 | 规格 | 产品描述 |
---|---|---|---|
rtStar™ tRF&tiRNA Pretreatment Ki | AS-FS-005 | 12 Reactions | 3’氨酰基末端去除 3‘环磷酸末端去除 5’羟基末端磷酸化 m1A、m1G、m3C去甲基化 |
rtStar™ tRF&tiRNA First-Strand cDNA Synthesis Kit | AS-FS-003 | 6 Reactions | 依次将 3'-Adaptor 连接到 RNA 的 3'-末端,将 5'-Adaptor 连接到 RNA 的 5'-末端 |
rtStar™ tRF&tiRNA First-Strand cDNA Synthesis Kit | AS-FS-003-02 | 12 Reactions | 依次将 3'-Adaptor 连接到 RNA 的 3'-末端,将 5'-Adaptor 连接到 RNA 的 5'-末端 |
tRFs&tRF&tiRNA是一类由tRNA发生精确切割而产生的非编码小RNA分子,近来研究表明,这类小RNA分子具有多种生物学功能,比如类似于microRNA参与RNA干扰;调节靶向mRNA的稳定性;在细胞应激条件下促进应激颗粒(SG)的组装;以及调控细胞凋亡等。此外,tRFs&tiRNAs还与癌症、神经退行性疾病等多种疾病紧密关联。 然而,tRF&tiRNAs 的分子特性对其精确的表达定量造成了挑战。 由于其独特的前体与切割方式,tRF&tiRNAs携带有多种内部或末端修饰。tRF和tiRNA可能保留了来源的tRNA上的甲基化修饰(m1A、m1G和m3C等)和氨酰基末端,tiRNAs常由RNA内切酶Angiogenin切割产生,这类内切酶会在切割位点产生5‘羟基(5’-OH)末端与3’环磷酸(3‘-cP)末端。许多当前标准的cDNA文库构建方法,特别是针对小非编码RNA的方法,包含了将3’和5’寡核苷酸接头连接到RNA的3’和5’末端的接头连接步骤,需要底物小RNA 5’端为磷酸,3‘端为羟基。此外,tRFs&tiRNAs的内部修饰比如m1A, m1G与m3C会严重阻碍反转录过程。为了准确检测tRFs&tiRNAs,这些修饰必须被有效的去除。
图1. tRF&tiRNA的常见修饰可以干扰接头连接和cDNA合成,从而显著降低cDNA文库构建的质量
此外,tRF&tiRNAs 是通过精确的生物发生过程从 tRNA 或 pre-tRNA 产生的。 传统的 qPCR 很难将 tRF&tiRNA 与其前体(tRNA 或 pre-tRNA)区分开来,因为它们共享相同的序列。 为了实现 tRFs&tiRNAs 的高保真和准确定量,Arraystar 开发了一个优化的检测系统,由两个产品组成:rtStar™ tRF&tiRNA Pretreatment Kit 和 rtStar™ tRF&tiRNA First-Strand cDNA Synthesis Kit。 预处理试剂盒旨在去除 tRF和tiRNA的内部和末端修饰。 通过在 tRF&tiRNA 的 3' 和 5' 端引入两个人工序列,第一链cDNA试剂盒可以有效地将 tRF&tiRNA 与其前体和其他小 RNA 区分开来。