tsRNA(tRF&tiRNA)测序

  • 简介
  • 技术难点与挑战
  • 技术特点
  • 结果展示
  •       tRFs和tiRNAs是tRNA及其前体通过精确调控的加工过程产生的,作为小非编码RNA行使多种生理功能,与诸多生理病理过程相关(图1)。据报道,tRFs&tiRNAs能够以microRNA的方式参与RNA干扰;结合蛋白因子并调节目标mRNA的稳定性;与细胞色素C互作,调控细胞凋亡;改变胚胎转录级联调控,作为父本表观遗传因子介导代谢疾病遗传;多种应激条件下促进应激颗粒的组装。

          tRF&tiRNAs的组成和数量高度依赖于具体的细胞类型和病理状况,使得它们成为一类优质的生物标志物[1]。例如,tRFs&tiRN-As之间的比例关系能够作为癌症存活期指标和潜在的诊断标志物[2]。同时,相比其他microRNA,tRNA和tRFs&tiRNAs类群广泛富集于各种生物体液中[3-4]


     

    图1. tRFs&tiRNAs功能及相关疾病

    Aksomics(康成生物)tRF&tiRNA测序服务提供从样品到数据的全套解决方案。根据我们tRF&tiRNA测序和表达谱分析中得到的丰富信息,按照tRF&tiRNA:为什么以及如何研究它们?中提供的方法及应用,科研工作者们能够更便捷地推进他们在这个新兴领域的研究工作。


    参考文献 

    1. Telonis A.G. et al. (2015) "Dissecting tRNA-derived fragment complexities using  personalized transcriptomes reveals novel fragment classes and unexpected dependencies." Oncotarget 6(28):24797-822 [PMID: 26325506]

    2. Olvedy M. et al. (2016) "A comprehensive repertoire of tRNA-derived fragments in prostate cancer." Oncotarget [PMID: 27015120]

    3. Schageman J. et al. (2013) "The complete exosome workflow solution: from isolation to characterization of RNA cargo." Biomed Res Int 2013:253957[PMID:24205503]

    4. Dhahbi J.M. et al. (2013) "5' tRNA halves are present as abundant complexes in serum, concentrated in blood cells, and modulated by aging and calorie restriction." BMC Genomics 14:298 [PMID: 23638709]





  • tsRNAs的序列上存在多种修饰,使其不适于直接进行standard small RNA-seq。丰富的碱基修饰会严重阻碍反转录的进行,而多种特异末端修饰使其不能与接头连接。为了得到更为精准的tsRNAs表达谱,康成生物tsRNAs测序服务包含了由Arraystar开发的建库前期处理流程。

    图释:完善的前处理方案,保证tsRNAs能被准确检测

    完善的前处理显著提高tsRNAs检测准确性


    图释:不同类型tiRNAtRFreads比例统计,红:不做预处理   蓝:做预处理



  • 1、完善的前处理方案:针对tsRNAs丰富的碱基修饰及末端修饰,开发了专门的去甲基化处理与末端修饰处理方案(脱氨基、去磷酸化、末端磷酸化).

      前期处理:   脱氨基——去除3’端氨基酸

    去磷酸化——将3’端环磷酸处理成羟基

    末端磷酸化——将5’端羟基磷酸化

    去甲基化——去除m1A、m3C、m1G等甲基化修饰,防止反转录中断


    图释: tsRNAs测序操作流程图

    2、Arraystar独家授权的测序分析系统:康成生物使用Arraystar独家授权的”tsRNAs Analysis System”进行分析,包括:基于tRNA拓扑结构和统计显著性的精准注释与分类系统;全面的tsRNAs数据库信息;tsRNAs专注的生物信息学与统计学分析。

    3、免费赠送microRNA表达及差异分析:tsRNAs测序的文库切胶范围覆盖microRNA,康成生物将免费提供microRNA的表达和差异分析。一次测序,两套结果,满足客户对tRF、tiRNA及microRNA的表达研究需求。

    4、无缝链接tRNA系列服务:tsRNAs-seq可以联合应用康成提供的tRNA-seq、tsRNAs PCR array及tRNA PCR array技术服务,深入挖掘tRFs , tiRNAs及tRNAs在生命科学及医学中的功能作用


  • 基础分析

    高级分析

    测序序列质量评估

    数据预处理

    基因组比对

    tsRNAs注释

    tsRNAs表达及差异分析

    microRNA表达谱及差异分析

    tsRNAs靶基因预测



    基础数据分析展示

    tsRNAs差异表达分析 Arraystar独家授权的”tsRNAs Analysis System”分析tsRNAs表达谱和表达变化。同时,通过热图、散点图、火山图、Venn分析及PCA 分析等统更加清晰明确地展示样本之间的差异性。

    图释:表达及差异分析数据表

    特色数据分析展示(包含于标准报告中,不另外收费)


    不同类型tsRNAs表达量统计:依据比对到tRNA位置的不同,可以将tsRNAs分成多种类型。不同种类tsRNAs之间,其产生及作用机制可能存在差异,因此了解不同种类tsRNAs的表达情况对于后续研究具有很好的指引作用。

    图释:不同类型tsRNAs表达量统计