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单细胞测序技术服务 靶向单细胞测序（lncRNA&mRNA） 单细胞测序 |
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生物分子凝聚体研究 HyPro靶RNA临近标记技术 |
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蛋白表达定量 Label free非标定量 TMT标记定量 PRM靶向定量 |
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外泌体之外结合AGO的smallRNA作为疾病诊断的biomarker
Argonaute (包含AGO1-4)蛋白是组成RISCs(RNA-induced silencing complex )复合物的主要成员。其经典功能是在细胞质中装载miRNA形成RISC复合物，通过序列互补配对结合靶基因mRNA 3’UTR，促进mRNA降解或蛋白翻译抑制。AGO蛋白-smallRNA的复合物可以分泌到体液中并稳定存在，作为潜在的疾病诊断的生物标志物。
AGO APP(Affinity Purification by Peptides) smallRNA测序利用特异性结合AGO1-4蛋白的T6B-coupled GST beads富集结合AGO1-4的smallRNA，包括miRNA、tsRNA等，进行smallRNA测序筛选，从而获得结合AGO蛋白发挥调控功能的smallRNA。
AGO APP smallRNA芯片服务利用特异性结合AGO1-4蛋白的T6B肽段偶联GST磁珠富集结合AGO蛋白的smallRNA，包括miRNA、tsRNA、Agotron等，进行smallRNA芯片筛选，从而获得结合AGO蛋白调控RNA稳定性和翻译的smallRNA。
图1. 血浆外泌体之外结合AGO2稳定存在的miRNA[2]
u AGO APP可同时富集AGO1/2/3/4蛋白结合的smallRNA进行检测；
u AGO APP使用的T6B-coupled beads与Ago亲和性高，且检测物种更广泛（从昆虫到人都可检测）；
u AGO APP smallRNA芯片能检测miRNA、tsRNA、Agotron等多种smallRNA，覆盖范围广；
u 芯片探针检测特异性高，操作简单，样本需求量少。
参考文献：
[1] Iwakawa HO, et al. Mol Cell. 2022. PMID: 34942118
[2] Arroyo, Jason D et al. PNAS. 2011. PMID: 21383194
实验原理
AGO APP(Affinity Purification by Peptides) smallRNA芯片利用特异性结合AGO1-4蛋白的T6B-coupled GST beads富集结合AGO1-4的smallRNA[7]，包括miRNA、tsRNA、Agotron等，进行AGO APP smallRNA芯片筛选，从而获得结合AGO蛋白发挥调控功能的smallRNA（对于AGO结合的蛋白也可同时进行质谱检测）。
样本用量：细胞用量>2*10^7个；组织>50mg；血浆血清>2ml。
实验流程
1.细胞/组织裂解；
2.AGO APP富集结合的smallRNA；
3.SmallRNA 3’去磷酸化，DMSO变性，Cy3C标记；
4.与Arraystar smallRNA芯片杂交；
5.扫描芯片，进行数据分析；
6.提供结果报告。
1.差异AGO APP富集的smallRNA注释信息表格
2.差异AGO APP富集的smallRNA火山图、散点图、聚类图
3.深入数据分析：smallRNA 靶基因预测及靶基因GO/pathway分析
