单细胞测序技术服务 靶向lncRNA单细胞全转录组测序 单细胞全转录组测序 |
生物分子凝聚体研究 HyPro靶RNA临近标记技术 |
RNA-蛋白相互作用 HyPro - MS CHIRP – MS RNA pull-down MS |
RNA-RNA/DNA相互作用 HyPro-seq/芯片 CHIRP-seq |
蛋白-RNA相互作用 AGO APP seq/芯片 RIP-RNA seq/芯片 |
蛋白-蛋白相互作用 RIME MS CoIP-MS |
NGS测序技术服务 R-loop 测序分析服务 |
NGS测序技术服务 环状DNA测序 |
基因芯片技术服务 Small RNA修饰芯片 m6A单碱基分辨率芯片 mRNA&lncRNA表观转录组芯片 circRNA表观转录组芯片 |
NGS测序技术服务 表观转录组学测序服务 RNA m6A甲基化测序(MeRIP Seq) |
LC-MS mRNA碱基修饰检测 tRNA碱基修饰检测 |
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Ribo-seq Ribo seq |
核糖体-新生肽链复合物(RNC) RNC联合 circRNA芯片 RNC联合 lncRNA芯片 RNC联合mRNA-seq |
蛋白表达定量 Label free非标定量技术 TMT标记定量技术 PRM靶向定量 |
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外泌体之外结合AGO的smallRNA作为疾病诊断的biomarker
Argonaute (包含AGO1-4)蛋白是组成RISCs(RNA-induced silencing complex )复合物的主要成员。其经典功能是在细胞质中装载miRNA形成RISC复合物,通过序列互补配对结合靶基因mRNA 3’UTR,促进mRNA降解或蛋白翻译抑制。AGO蛋白-smallRNA的复合物可以分泌到体液中并稳定存在,作为潜在的疾病诊断的生物标志物。
AGO APP(Affinity Purification by Peptides) smallRNA测序利用特异性结合AGO1-4蛋白的T6B-coupled GST beads富集结合AGO1-4的smallRNA,包括miRNA、tsRNA等,进行smallRNA测序筛选,从而获得结合AGO蛋白发挥调控功能的smallRNA。
AGO APP smallRNA芯片服务利用特异性结合AGO1-4蛋白的T6B肽段偶联GST磁珠富集结合AGO蛋白的smallRNA,包括miRNA、tsRNA、Agotron等,进行smallRNA芯片筛选,从而获得结合AGO蛋白调控RNA稳定性和翻译的smallRNA。
图1. 血浆外泌体之外结合AGO2稳定存在的miRNA[2]
u AGO APP可同时富集AGO1/2/3/4蛋白结合的smallRNA进行检测;
u AGO APP使用的T6B-coupled beads与Ago亲和性高,且检测物种更广泛(从昆虫到人都可检测);
u AGO APP smallRNA芯片能检测miRNA、tsRNA、Agotron等多种smallRNA,覆盖范围广;
u 芯片探针检测特异性高,操作简单,样本需求量少。
参考文献:
[1] Iwakawa HO, et al. Mol Cell. 2022. PMID: 34942118
[2] Arroyo, Jason D et al. PNAS. 2011. PMID: 21383194
实验原理
AGO APP(Affinity Purification by Peptides) smallRNA芯片利用特异性结合AGO1-4蛋白的T6B-coupled GST beads富集结合AGO1-4的smallRNA[7],包括miRNA、tsRNA、Agotron等,进行AGO APP smallRNA芯片筛选,从而获得结合AGO蛋白发挥调控功能的smallRNA(对于AGO结合的蛋白也可同时进行质谱检测)。
样本用量:细胞用量>2*10^7个;组织>50mg;血浆血清>2ml。
实验流程
1.细胞/组织裂解;
2.AGO APP富集结合的smallRNA;
3.SmallRNA 3’去磷酸化,DMSO变性,Cy3C标记;
4.与Arraystar smallRNA芯片杂交;
5.扫描芯片,进行数据分析;
6.提供结果报告。
1.差异AGO APP富集的smallRNA注释信息表格
2.差异AGO APP富集的smallRNA火山图、散点图、聚类图
3.深入数据分析:smallRNA 靶基因预测及靶基因GO/pathway分析