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单细胞测序技术服务 靶向lncRNA单细胞全转录组测序 单细胞全转录组测序 |
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生物分子凝聚体研究 HyPro靶RNA临近标记技术 |
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RNA-蛋白相互作用 HyPro - MS CHIRP – MS RNA pull-down MS |
RNA-RNA/DNA相互作用 HyPro-seq/芯片 CHIRP-seq |
蛋白-RNA相互作用 AGO APP seq/芯片 RIP-RNA seq/芯片 |
蛋白-蛋白相互作用 RIME MS CoIP-MS |
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NGS测序技术服务 R-loop 测序分析服务 |
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NGS测序技术服务 环状DNA测序 |
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基因芯片技术服务 Small RNA修饰芯片 m6A单碱基分辨率芯片 mRNA&lncRNA表观转录组芯片 circRNA表观转录组芯片 |
NGS测序技术服务 表观转录组学测序服务 RNA m6A甲基化测序（MeRIP Seq） |
LC-MS mRNA碱基修饰检测 tRNA碱基修饰检测 |
PCR技术服务 MeRIP-PCR技术服务 m6A绝对定量RT-PCR技术服务 m6A单碱基位点PCR（MazF酶切法）技术服务 |
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Ribo-seq Ribo seq |
核糖体-新生肽链复合物(RNC) RNC联合 circRNA芯片 RNC联合 lncRNA芯片 RNC联合mRNA-seq |
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蛋白表达定量 Label free非标定量技术 TMT标记定量技术 PRM靶向定量 |
实时荧光定量PCR技术是在普通PCR反应体系中加入荧光试剂，利用荧光信号实时检测PCR进程，避免了传统PCR以终产物检测定量产生的偏差，提高实验的重复性。绝对定量的实时荧光定量PCR是在实时荧光定量PCR时加入标准品通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。绝对定量的实时荧光定量PCR能够专一、灵敏、快速、高重复性地精确定量起始模板浓度，该技术已被广泛用于检测细胞mRNA表达量的变化、比较不同组织的mRNA表达差异、验证基因芯片和siRNA干扰的实验结果。
康成生物丨数谱生物为您提供mRNA&lncRNA绝对定量实时定量PCR技术服务，您只需要提供保存完好的组织或细胞标本，本公司专业的技术服务人员就可替您完成绝对定量的实时定量PCR实验操作和数据分析，提供给您完整的实验报告。
每微克 total RNA target 1 RNA拷贝数=X
如果细胞的数量为106，总RNA为15ug，则每个细胞的target 1的拷贝数为：（X×15）/ 106
1. 引物设计、合成
设计并合成目的基因的特异性PCR引物。
2. 样品RNA抽提
a. 若实验对象为组织样品，取适量（50-100mg）新鲜组织样品或正确保存的组织样品，加1ml的RNA抽提试剂Trizol（Invitrogen），匀浆后抽提RNA。
b. 若实验对象为细胞样品，每份样品取1×106～1×107细胞，完全吸去培养液后加1ml的RNA抽提试剂Trizol（Invitrogen），裂解后抽提RNA。
3. RNA质量检测
a．紫外吸收测定法测定RNA在波长260nm和280nm的吸收值，获得RNA的浓度并通过A260/280及A260/230的吸收比值判断RNA的纯度。
b．甲醛变性琼脂糖凝胶电泳检测RNA纯度和完整性。
注：用于实时定量PCR检测的RNA样品，必须高纯度、完整，没有RNase 污染（降解的样品不能用于实时定量PCR检测），同时提取方法必须保证所得样品包含完整的小RNA部分。
4. 逆转录合成cDNA
每个样品我们加入已知浓度的RNA（RNA Spike-in）并使用rtStar™ First-Strand cDNA Synthesis Kit (Cat# AS-FS-001, Arraystar) 试剂盒进行反转录,合成cDNA第一链。
5. 实时定量PCR
在合成cDNA第一链中加入标准品与cDNA一同作为模板进行实时定量PCR扩增，，根据Ct值制备标准曲线。
6. 分析结果、提供实验报告
各样品的目的基因和标准品分别进行Realtime PCR反应。根据标准品绘制标准曲线，各样品目的基因和RNA Spike in的cDNA拷贝数结果直接由机器生成。（每个样品的目的基因cDNA拷贝数x RNA Spike in的RNA拷贝数）除以RNA Spike in的cDNA拷贝数，即为此样品此基因的校正后的RNA拷贝数。
