服务优势
● 读通型逆转录：工程化酶读通 m1A 而不截断，紧密折叠的 tRNA 位点同样可判读
● 保守位点定量：错配比例直接给出第 9、14、58 位等保守位点的 m1A 水平
● 抗体无关：回避抗体对 tRNA 紧密结构的捕获困难与非特异结合
● 翻译保真度读出：m1A 对氨酰化与解码准确性的调控可在位点层面追踪
● tRNA 专属注释：每个位点给出成熟 tRNA 相对坐标、基因归属、反密码子、isoacceptor 与结构域信息
● 动态变化敏感：可捕捉应激条件下保守位点 m1A 的增减幅度
背景介绍
处于保守位置的 N1-甲基腺苷（例如第 9、14 或 58 位核苷酸）可稳定 L 形折叠并调控氨酰化与翻译保真度；这些位点的丢失或增加会扰乱翻译，并与发育缺陷及癌症表型相关。抗体捕获策略分辨率粗且难以应对 tRNA 的紧密结构；m1A-Quant-seq 则借助可耐受 m1A 的工程化逆转录酶，在读通修饰碱基时留下可重复的错配，其突变比例即反映该位点的 m1A 水平。
关键概念：m¹A tRNA单碱基测序（m1A-Quant-seq）利用工程化逆转录酶读通 tRNA 中的 m1A 位点并产生可重复的突变特征，将该位点的突变比例转化为 m1A 化学计量，从而在单碱基分辨率上定量 m1A。
图 1. m1A-Quant-seq m¹A 检测原理。
实验流程
图 2. m1A-Quant-seq 实验流程。
生物信息分析
面向 tRNA 的分析在单碱基分辨率上定位 m1A、定量单位点化学计量并标记差异修饰。每个位点均归属到参考 tRNA 库并附带反密码子、isodecoders、isoacceptors 与结构域信息；结果以表格、分布与 motif 图以及可直接用于浏览器的可视化文件形式提供。
交付内容
• 原始 tRNA m1A 测序数据（FASTQ），可用于数据仓库提交。
• 样本与测序质控报告，含排序后的 BAM 比对文件与比对统计。
• 高置信度单碱基 m1A 位点表（XLSX），含坐标、tRNA 身份与 m1A 化学计量。
• tRNA 特征分布图与 m1A 一致性 motif 分析图（PDF/PNG）。
• 差异 m1A 分析表（XLSX），含倍数变化等统计信息。
• m1A 修饰 tRNA 宿主基因的 功能富集分析报告（HTML/PDF/PNG）。
• 基因组浏览器轨道（bigWig/bedGraph）及结构化项目报告。
研究应用
• 翻译保真度：把保守位点的 m1A 水平与氨酰化效率、解码准确性关联
• 应激响应：追踪应激或营养变化下 tRNA m1A 的动态增减
• tRNA 稳定性：把 m1A 水平与 L 形折叠稳定性和 tRNA 周转关联
• 癌症与发育：绘制肿瘤或发育程序相关 isoacceptors 上的 m1A 变化图谱
常见问题
m1A-Quant-seq 能否在单碱基分辨率上识别 tRNA 中的 m1A？
可以。逆转录过程中工程化酶在 m1A 位点记录突变，因此每个位点都可定位并定量到单个核苷酸。
我会获得哪些数据？
您将获得原始 reads、质控与比对报告、含 tRNA 注释与化学计量的单碱基 m1A 表、分布与 motif 图，以及项目报告。
该方法与基于抗体的 tRNA m1A 分析有何不同？
这一方法不依赖富集，因此没有下拉偏倚，也能分析结构紧密的 tRNA；得到的是单位点的定量 m1A，而不是宽泛的区域信号。
适合哪些样本类型？
我们推荐使用纯化总 RNA，也可以为您提供 RNA 提取服务。
高分辨率 tRNA m1A 检测有何价值？
精确的位点可以告诉您哪些 isoacceptors 与反密码子携带该修饰，从而更清晰地把 m1A 与翻译或疾病联系起来。
参考文献
[1] Zhou H, Rauch S, Dai Q, et al. Evolution of a reverse transcriptase to map N1-methyladenosine in human messenger RNA. Nature Methods 2019;16(12):1281-1288. DOI: 10.1038/s41592-019-0550-4
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[3] Wang, Y., & Zhang, J. (2024). Methyladenosine m1A RNA modification and cancer: Methodologies and clinical perspectives. MDPI Life, 14(10), 1230.
[4] Zhao, Y., et al. (2024). Chemical manipulation of m1A mediates its high-sensitivity detection in human small RNA sequencing. RNA Journal, 30(5), 580-592.