服务优势
● 近中性协同催化：羰基有机催化剂与硼酸协同，在温和条件下选择性把未修饰 A 脱氨为肌苷
● 绝对单碱基定量：m6A 抗脱氨、仍读作 A，位点级化学计量可直接读出并比对
● 可逆保护保 RNA 完整：kethoxal 鸟嘌呤保护基可逆，避免酸性脱氨对转录本的降解
● 低背景读出：优化的逆转录条件把背景噪声压低，弱修饰位点同样可判读
● 抗体无关：不依赖 m6A 抗体，回避免疫沉淀的 motif 偏好与交叉反应
背景介绍
经典抗体法 m6A 分析（如 MeRIP-seq）分辨率有限且存在固有 motif 偏好；而早期化学脱氨方法依赖剧烈酸性条件，会降解 RNA，无法实现绝对的单碱基 m6A 定量。同一流程可扩展至长链非编码 RNA（lncRNA），让研究者可以在同一次实验里并行分析 mRNA 与 lncRNA 上的该修饰。
我们的m6A RNA单碱基测序（CAM-seq）通过协同催化克服上述壁垒：羰基有机催化剂与路易斯酸（硼酸）在温和的近中性条件下选择性将未修饰腺苷（A）脱氨为肌苷（I），而 m6A 抗脱氨、仍读作腺嘌呤（图 1）。可逆的 kethoxal 鸟嘌呤保护基保持 RNA 完整性，优化后的条件进一步降低了背景干扰，从而在真正的单碱基分辨率上给出绝对 m6A 化学计量。
关键概念：m6A RNA单碱基测序（CAM-seq）利用羰基有机催化剂与路易斯酸的协同催化，在温和的近中性条件下选择性将未修饰腺苷脱氨为肌苷，而 m6A 保持完整，从而在单碱基分辨率上实现 m6A 的绝对定量。
图 1. CAM-seq m6A 检测机制。温和的近中性化学（pH ≈ 6）选择性将未修饰腺苷（A）脱氨为肌苷（I，测序读作 G），而 m6A 抗脱氨、仍读作 A。每个位点的 A/G 比值给出绝对 m6A 化学计量。
实验流程
图 2. CAM-seq 实验流程。
生物信息分析
生物信息分析流程将测序 reads 比对到参考基因组，识别 A→G 转化特征，并在单碱基分辨率上定量 m6A 修饰化学计量。分析内容包括 motif 特征（GAC、AAC 及非经典 motif）、metagene 分布、差异甲基化、功能富集与基因组浏览器可视化，提供对 m6A 表观转录组的完整定量视图。
交付内容
• 原始 m⁶A mRNA 测序 FASTQ 数据文件，可直接提交至 GEO/SRA 等公共数据库。
• 样本与测序质控报告，含排序后的 BAM 比对文件及核心比对统计。
• 高置信度单碱基 m⁶A 位点注释表（XLSX），含坐标、基因与定量结果。
• 单碱基 m⁶A 转录本特征分布图与一致性 m⁶A motif 分析图（PDF/PNG）。
• 单碱基分辨率 m⁶A 差异甲基化分析表（XLSX），含倍数变化等统计信息。
• m⁶A 修饰基因的功能富集分析报告（HTML/PDF/PNG）。
• 兼容基因组浏览器的可视化文件（bigWig/bedGraph）及完整的 m⁶A 分析项目报告。
研究应用
• 位点级 m6A 图谱：在 mRNA 与 lncRNA 上绘制绝对定量的 m6A 位点图谱
• 化学计量比较：比较不同处理或疾病状态下同一位点的 m6A 比例变化
• 机制研究：把位点级 m6A 与 mRNA 稳定性、翻译及剪接结果关联
常见问题
哪些样本类型适用于m6A RNA单碱基测序（CAM-seq）？
我们接受从细胞、组织、血液或其他生物来源（如培养细胞沉淀与冷冻组织样本）提取的总 RNA。如不确定样本类型或制备方式是否合适，请在送样前联系技术支持确认。
CAM-seq 能否在单碱基分辨率上识别 m6A？
可以。未修饰腺苷被选择性脱氨为肌苷，在逆转录中读作鸟嘌呤，而 m6A 抗脱氨、仍读作腺嘌呤。该 A→G 特征在单碱基分辨率上精确定位每个 m6A 位点，并同步高精度定量其修饰化学计量。
CAM-seq 与抗体法或其他化学方法有何不同？
抗体法（如 MeRIP-seq）分辨率有限，也容易带入固有的 motif 偏好。CAM-seq 不使用抗体，采用温和的近中性化学和可逆的 kethoxal 鸟嘌呤保护基，既避免了 RNA 降解与逆转录停滞，也让检测结果更接近无偏。
CAM-seq 与 GLORI2-seq 相比有何优势？
两者都通过把未修饰腺苷脱氨为肌苷、而 m6A 保持完整来实现单碱基定量，差别在化学条件与 RNA 保护策略。GLORI2-seq 依赖一锅法转化；CAM-seq 则采用羰基有机催化剂与硼酸的协同催化，在更温和的近中性条件下反应，并配以可逆的 kethoxal 鸟嘌呤保护基，因此更有利于保持 RNA 完整性、减少降解与逆转录停滞。整体而言，CAM-seq 在流程温和度与结果稳定性上更有优势，更易于获得可靠、可复现的 m6A 定量结果，也更适合对 RNA 完整性要求较高的课题。
这项服务是否也覆盖 lncRNA？
是的，我们提供mRNA修饰和mRNA 与长链非编码 RNA（lncRNA）修饰两类服务供选择。两类转录本可以在同一次实验里一起分析，您不必拆成两个项目，研究范围也随之打开。
参考文献
[1] Wang P, Ye C, Zhao M, Jiang B, He C. Small-molecule-catalysed deamination enables transcriptome-wide profiling of N6-methyladenosine in RNA. Nature Chemistry 2025. DOI: 10.1038/s41557-025-01801-3
[2] Garcia-Campos MA, et al. Deciphering the “m6A code” via antibody-independent quantitative profiling. Cell 2019;178:731-747.