m¹A RNA单碱基测序(m1A-Quant-seq)

m¹A RNA单碱基测序(m1A-Quant-seq)是一种高精度分析技术,可在单碱基分辨率上实现 m1A 表观转录组的精准定位与定量分析。在 m1A-Quant-seq 中,工程化逆转录酶不会像常规逆转录酶那样在 m1A 修饰处停滞,而是高效读通 m1A 位点并产生特征性突变信号;该技术克服了经典 m1A-MeRIP-seq 的局限,提升碱基判定准确性并提高流程通量。

Aksomics 为您提供从样本到数据的全流程服务,涵盖 RNA 样本质检、文库构建、高通量测序、生物信息分析与注释,直至最终项目报告,让您可以专注于 m1A 表观转录组数据,不必自己承担复杂的实验搭建。

服务优势

读通型逆转录:工程化逆转录酶读通 m1A 而不提前截断,位点因此能被完整判读

突变率即化学计量:每个位点可重复的错配比例直接换算为 m1A 修饰百分比

分辨率跨越 MeRIP:把抗体法约 100–200 nt 的峰宽压缩到真正的单碱基级别

零抗体偏倚:不用 m1A 抗体,回避免疫沉淀的非特异结合、交叉反应与批间差异

背景介绍

经典抗体法(如 m1A-MeRIP-seq)分辨率低(峰宽约 100–200 nt)且存在严重的逆转录(RT)停滞,无法进行绝对定量,成为 RNA 表观转录组研究的一大盲区。

我们的 m1A-Quant-seq 通过工程化逆转录酶与优化的化学条件,克服了上述技术壁垒:该平台可高效读通 m1A 修饰碱基,并将每个 m1A 位点转化为精确、可重复的错配突变特征(图 1),从而在真正的单碱基分辨率上实现定量分析。

关键概念:m¹A RNA单碱基测序(m1A-Quant-seq)利用工程化逆转录酶读通 m1A 位点并产生可重复的突变特征,将每个位点的突变率转化为 m1A 化学计量,从而在单碱基分辨率上定量 m1A。

m1A-Quant-seq 检测原理。示例 RNA 序列为“A-m1A-m1A/A”,其中 m1A/A 表示该碱基位置 m1A 与未修饰 A 各占 50%。工程化逆转录酶在 m1A 位点诱导突变(测序中主要为 T),突变率即 m1A%

图 1. m1A-Quant-seq 检测原理。示例 RNA 序列为“A-m1A-m1A/A”,其中 m1A/A 表示该碱基位置 m1A 与未修饰 A 各占 50%。工程化逆转录酶在 m1A 位点诱导突变(测序中主要为 T),突变率即 m1A%。

实验流程

m1A-Quant-seq 实验流程

图 2. m1A-Quant-seq 实验流程。

生物信息分析

生物信息分析流程在单碱基分辨率上定位 m1A 修饰、定量 m1A 甲基化组,并分析差异修饰,以更好地理解其生物学功能并助力生物标志物应用。m1A-Quant-seq 服务提供详尽的分析与注释,帮助研究者研究 m1A 表观转录组并获得生物学/疾病洞察;大部分分析数据、表格与图形可直接用 PC 常用办公软件查看,并同时提供原始数据集供自行分析或提交数据仓库。

交付内容

• 原始测序数据文件(FASTQ 格式)。

• 样本与测序质控报告,以及含核心比对统计的排序 BAM 比对文件。

• 高置信度单碱基 m¹A 位点表(XLSX),含基因组坐标、宿主基因、绝对修饰化学计量(m1A%)、密码子位置、对应氨基酸及进化保守性分值。

• 转录本特征分布图(PDF/PNG)与 motif 分析图(PDF/PNG)。

• 差异甲基化分析表(XLSX)。

• 功能富集分析报告(HTML/PDF/PNG)。

• 兼容基因组浏览器的可视化文件(bigWig/bedGraph)及完整结构化项目报告。

研究应用

• 位点级定量图谱:在 mRNA 与 lncRNA 上输出 m1A 修饰百分比图谱

• 翻译调控:把位点级 m1A 水平与翻译效率、mRNA 稳定性关联

• 疾病导向:筛选差异修饰位点作为候选生物标志物

常见问题

m1A-Quant-seq 能否在单碱基分辨率上识别 m1A?

可以。m1A-Quant-seq 通过逆转录过程中在 m1A 位点诱导的特征性突变信号来检测 m1A,可在单个核苷酸位置实现精确定位与定量。

我会获得哪些数据?

您将获得完整的数据集与项目报告,包括:鉴定到的 m1A 位点、m1A 修饰百分比化学计量(m1A%)、转录本注释(CDS、UTR、终止密码子等)、可视化图形(IGV 轨道、热图、motif 图),以及可选的样本/条件间比较分析。

这项服务如何支持 m1A 研究?

我们会在单碱基分辨率上提供 m1A 的定位结果,帮您把修饰信息与转录本功能联系起来,为后续研究打好基础。

高分辨率 m1A 检测有何价值?

精确的 m1A 图谱能提供可靠的位点级证据,让研究结论更有把握。

参考文献

[1] Zhou H, Rauch S, Dai Q, et al. Evolution of a reverse transcriptase to map N1-methyladenosine in human messenger RNA. Nature Methods 2019;16(12):1281-1288. DOI: 10.1038/s41592-019-0550-4

[2] Li, X., Xiong, X., Zhang, M., Wang, C., Qian, S. B., & Yi, C. (2017). Base-resolution mapping reveals distinct m1A methylome in nuclear- and mitochondrial-encoded transcripts. Molecular Cell, 68(5), 993-1005. PMID: 29107537

[3] Wang, Y., & Zhang, J. (2024). Methyladenosine m1A RNA modification and cancer: Methodologies and clinical perspectives. MDPI Life, 14(10), 1230.

[4] Zhao, Y., et al. (2024). Chemical manipulation of m1A mediates its high-sensitivity detection in human small RNA sequencing. RNA Journal, 30(5), 580-592.

请您留言

康成生物 | 数谱生物欢迎来电咨询:400-886-5058

提交