01这项服务报告什么
O8G RNA单碱基测序（O8G-miSeq）用 O8G 特异性抗体富集含修饰的片段，再结合 G>T 突变读出与配对的 Input 对照，在单碱基分辨率上定位 miRNA 群体中的 O8G 位点。
分析聚焦 miRNA seed、pri-miRNA 与成熟 miRNA，交付里给出位点表、motif 与分布图，并把位点与 miRNA–mRNA 靶向关系放在一起解读。
服务提供两种转录本范围 —— 只做 miRNA 群体，或把 miRNA 与其前体一起纳入同一次实验。
02服务优势
- 抗体特异富集：用 O8G 特异性抗体捕获修饰片段，先把候选区间收窄再测序。
- G>T 突变读出：氧化后的鸟嘌呤在配对行为上偏向腺嘌呤，读出特征被用来把位点落到具体碱基。
- 配对 Input 对照：每个样本带一份未富集文库，富集倍数因此可以与背景直接比较，减少把非特异信号当修饰的风险。
- 聚焦 miRNA 群体：覆盖 miRNA seed、pri-miRNA 与成熟 miRNA，适合以 miRNA 为核心的研究问题。
- 位点与功能一起给：位点结果可与 miRNA–mRNA 靶向关系、下游生物学效应的变化放在一起解读。
可选转录本范围
miRNA 群体｜miRNA 与前体03背景与检测原理
O8G 是活性氧氧化 RNA 中鸟嘌呤之后的产物，属于氧化型 RNA 修饰。它的配对行为偏向腺嘌呤，常诱导 G>T 突变，并与氧化还原驱动的疾病联系在一起，近几年才进入表观转录组研究的视野。
O8G-miSeq 把两条线索合起来用：抗体负责把含修饰的片段富集出来，突变特征负责在该片段内部指出具体位置；再以同一批样本的 Input 文库作为对照，把真正的富集信号从背景里分出来。
miRNA seed 上的 O8G 分布不是随机的，它参与调控依赖氧化还原的癌症发生。Widespread 8-oxoguanine modifications of miRNA seeds · Nature Cell Biology 2023 · DOI 10.1038/s41556-023-01209-6
04实验流程
从 RNA 样本到单碱基 O8G 位点，见下图。
05生物信息分析与交付
分析先用 Input 对照筛查富集信号，再以 G>T 突变特征判定位点位置，随后报告修饰前后的靶基因变化。内容覆盖位点表、motif 与分布图、差异修饰与基因组浏览器轨道。
交付内容
- O8G-IP 与 Input 两套文本文库的原始测序数据（FASTQ），可直接提交 GEO/SRA。
- 质控报告，含比对文件（BAM）与核心比对统计。
- 单碱基 O8G 位点表（XLSX）：坐标、位点分值与修饰水平。
- miRNA 与 pri-miRNA 上的 O8G motif 与分布图（PDF/PNG）。
- 差异修饰分析表（XLSX），含倍数变化与统计显著性。
- 含 O8G 的 miRNA 的靶基因与功能富集报告。
- 基因组浏览器轨道文件（bigWig/bedGraph）与结构化项目报告。
06研究应用
- miRNA 氧化修饰图谱：在 miRNA seed 与前体上绘制 O8G 位点分布。
- 氧化应激与疾病：比较氧化还原状态不同的样本，看哪些 miRNA 位点的修饰水平随之改变。
- 靶向关系解读：把修饰位点落在 seed 区的位置与 miRNA–mRNA 靶向关系的改变放在一起分析。
- 候选标志物：在病变与对照之间筛出差异修饰的 miRNA 位点，缩小后续验证范围。
- 功能读数说明：翻译效率、转录本半衰期、蛋白或表型等功能读数由研究方或合作平台完成，不在本门户服务清单内。
07常见问题
为什么 O8G 需要抗体富集加突变判读两步？
单靠富集只能说明某个区间里有修饰，落不到具体碱基；单靠突变特征又会受测序错误干扰。先用抗体把片段收窄，再在片段内用 G>T 特征定位，两步合起来才有位点级结果。
Input 对照在这里起什么作用？
它给出同一批样本未富集时的背景水平。富集信号与背景放在一起比，才能判断某个区间是真的带修饰，还是非特异吸附。
这项服务覆盖哪些 RNA 分子？
以 miRNA 群体为主，覆盖 miRNA seed、pri-miRNA 与成熟 miRNA；具体纳入范围按研究问题确定。
位点是按修饰比例报，还是按富集强度报？
报的是位点级的修饰水平，来自该位点的特征信号；同时给出位点分值，便于判断可信度。
怎么把结果接到功能层面？
位点表会与 miRNA 的靶基因信息一起交付，可以据此看修饰是否落在 seed 区、以及对应的靶向关系是否发生变化。
08参考文献
- Widespread 8-oxoguanine modifications of miRNA seeds differentially regulate redox-dependent cancer development. Nature Cell Biology 2023. DOI 10.1038/s41556-023-01209-6
- Position-specific oxidation of miR-1 encodes cardiac hypertrophy. Nature 2020. DOI 10.1038/s41586-020-2586-0