01这条线报什么
RNA 修饰 RIP 测序是用抗体(或酶学手段)把带修饰的片段富集下来、再测序比较的一类路线。它给出的是区段层面的富集图谱:哪些转录本、哪些区域上有修饰,以及不同样本之间这个分布的变化。
因此它适合先筛:样本量大、候选未知时,用富集路线把范围收窄,再把候选区段放到单碱基路线上定位与定量。富集倍数不等于修饰比例,抗体本身也有结合偏好,这两点决定了它不适合直接当作位点级结论。
本组的方法分两类:抗体免疫沉淀(MeRIP 类、acRIP、O8G-IP、Ψ-RIP、hMeRIP),以及不经过抗体的富集路线(如 m6Am-Exo-Seq 的核酸外切酶处理)。页面里会写明每条路线到底走不走抗体。
029 条富集路线
按修饰类型排列,每条方法都按同一套结构展开:服务优势、背景与检测原理、实验流程、生物信息分析与交付、研究应用、常见问题与参考文献。
03与单碱基路线怎么配合
两条线回答的不是同一个问题,配合起来才完整:
| 阶段 | 走哪条线 | 拿到什么 |
|---|---|---|
| 先缩小范围 | RIP 富集(本页) | 哪些转录本与区段需要继续分析 |
| 再定位与定量 | 单碱基修饰测序 | 具体位点位置与修饰比例 |
富集路线把范围收窄,单碱基路线把位点定下来 —— 先用哪条,取决于样本量和问题的新鲜度。Garcia-Campos M A. et al., Cell 2019 · DOI 10.1016/j.cell.2019.06.013
04服务范围与交付
多数路线提供 mRNA、或 mRNA 与 lncRNA 两种转录本范围;具体到每条方法见对应页面。
通用交付内容
- 原始测序数据(FASTQ)与配对的 Input 文库数据(如方法设有对照)。
- 质控报告,含比对文件与核心比对统计。
- 富集区段表(XLSX):区段坐标、宿主基因与富集倍数。
- 富集图谱与分布图(PDF/PNG)。
- 差异富集分析表、功能富集报告与基因组浏览器轨道文件。
05常见问题
RIP 路线能给出具体的修饰位点吗?
不能。它给的是区段层面的富集分布;要位点位置与修饰比例,需要另走单碱基路线。两条线常常是配合使用的。
富集倍数能当修饰比例用吗?
不建议。富集倍数反映的是抗体把该片段拉下来的效率,受抗体亲和力与片段长度影响,不等于该位点的修饰比例。
为什么一定要配 Input 对照?
Input 给出同一批样本未富集时的背景。没有对照,富集信号无法与背景区分,也就无法判断哪些区段是真信号。
样本量大的项目怎么设计?
这正是这条线的强项:可以先按分组做富集测序,筛出变化明显的区段,再挑代表性样本走单碱基路线确认。
这组里有没有不走抗体的路线?
有。例如 m6Am-Exo-Seq 用核酸外切酶处理实现富集,不经过抗体免疫沉淀;它归在这一组是因为路线同为先富集再测序,页面上会写明这一点。