试剂盒与酶

修饰 RNA 工作里最难的部分常常在这里：把挡住反转录的结构处理掉、把酶反应之后的 RNA 清干净、在测序之前把 rRNA 去掉。

01这一组覆盖什么

这一组覆盖测定之前的那几步：修复或去除会阻断反转录的结构、清理酶反应之后的 RNA、以及在文库构建之前去除 rRNA。

修饰 RNA 工作里的多数困难位于这几步。带修饰的 tRNA 或片段不会被标准的反转录反应读出来，而一份总 RNA 里核糖体 RNA 的量远高于关心的分子。这里列出的产品直接对着这两个问题。

02试剂盒与试剂

名称与规格以产品线当前维护的版本为准，具体信息通过咨询入口确认。

产品	用途
rtStar™ tRF & tiRNA Pretreatment Kit 去掉片段末端的 3′-cP 并把 5′-OH 磷酸化成便于连接的形式，同时去除会阻断反转录的内部 m¹A、m¹G 与 m³C。
rtStar™ First-Strand cDNA Synthesis 系列按总 RNA、tRNA、小 RNA 等不同输入类型分成多种规格，把 RNA 转成一链 cDNA，供定量芯片、引物套装或测序使用。
Seq-Star™ RNAClean and smallEnrich Beads 磁珠法 RNA 纯化，用于酶反应之后清理 RNA，也用于把总 RNA 分出大 RNA 与小 RNA 两部分。
Seq-Star™ rRNA Removal Kit（人 / 小鼠 / 大鼠）酶法去除总 RNA 中的胞质 rRNA 与线粒体 rRNA，为测序文库构建做准备。
Arraystar SYBR® Green Real-time qPCR Master Mix 实时定量 PCR 的扩增试剂，与上述芯片和引物套装按同一套条件做过验证。

03反转录之前的前处理

tRNA 带有大量转录后修饰，其中几个会在 cDNA 合成过程中让反转录酶停下来。针对这一点的前处理发生在反转录之前，它决定了成熟 tRNA 能不能被测到。

tRNA 来源片段还有第二个问题：末端不是适合连接接头的形式。对应的前处理去掉 3′-cP、把 5′-OH 磷酸化成便于连接的 5′-P，并把会阻断反应的内部 m¹A、m¹G 与 m³C 去掉。同样的步骤也让真正的片段与它们的前体分开。

修饰会阻断反转录，末端结构会挡住接头连接——这两步处理不到位时，测到的低信号反映的是反应本身，而不是样品。Pajdzik K. et al., RNA 2024 · DOI 10.1261/rna.079966.124

04RNA 纯化与片段分流

磁珠法纯化用于酶反应之后（例如 DNase I 处理之后）回收 RNA，也用于把总 RNA 分成大 RNA 与小 RNA 两部分。小 RNA 部分可以回收短至十几个核苷酸的片段，而分流所用的阈值把含量很高的 5S rRNA 挡在小 RNA 部分之外。同一套磁珠可以单管操作，也可以放在 96 孔或 384 孔板上自动化运行。

去 rRNA 走的是酶法路线：把人、小鼠与大鼠总 RNA 中的胞质 rRNA（5S、5.8S、18S、28S）与线粒体 rRNA（12S、16S）去掉，同时保留带多聚腺苷酸与不带多聚腺苷酸的转录本，这一点对长链非编码 RNA 与反义转录本很重要。由于是酶解而不是把 rRNA 捕获在固相上，降解样品（例如 FFPE RNA）里已经断开的 rRNA 同样能被去掉。

05常见问题

为什么 tRNA 在反转录之前要做前处理？

tRNA 带有大量转录后修饰，其中几个会在 cDNA 合成过程中让反转录酶停下来，标准反应因此只能得到很少的 cDNA。先去处理掉这些修饰，后续定量或建库时能测到的 tRNA 才反映样品，而不是反映反应。

前处理试剂盒里包含反转录这一步吗？

前处理与一链 cDNA 合成被安排在同一条流程里，RNA 不需要在两个试剂盒之间转移，以免在这中间丢失。不同规格的差别在于它们修复的对象：有的只处理阻断反转录的内部修饰，有的还要把末端修成连接所需要的形状。

纯化磁珠能用在自动化流程里吗？

可以。同一套磁珠既可以单管操作，也提供 96 孔与 384 孔板式规格，因此从几管样品扩展到一整块板时，磁珠操作不需要重新开发。

去 rRNA 试剂盒适用于降解的 RNA 吗？

可以。它既能去掉完整的 rRNA，也能去掉降解样品中已经断开的 rRNA，因此对 FFPE 一类材料同样可用。这来自方法本身：rRNA 是被酶解掉的，而不是靠固相捕获，所以断开的 rRNA 分子一样会被去除。

GlycoRNA 检测相关的试剂也在这里吗？

GlycoRNA 的检测目前主要以服务形式提供，如果要问的是配套试剂的具体清单，建议通过咨询入口确认，页面只列出已经确定在售的那几类。