01四条服务线
RNA 修饰检测是在 RNA 分子上定位化学修饰、并给出修饰比例的一类分析。按「要位点还是要丰度、要单分子还是多分子类型」,分成下面四条路线。
02按研究目的选路线
先把问题定在一句话上,路线基本就出来了:
| 研究目的 | 走哪条线 | 这一线报什么 |
|---|---|---|
| 要知道某个位点有没有修饰、有多少 | 单碱基修饰测序 | 位点位置与修饰比例(部分方法给出位点级化学计量) |
| 要先在多组样本里筛出变化 | RNA 修饰 RIP 测序 | 区段层面的富集,不解析到单个碱基 |
| 要看多种 RNA 分子的修饰水平 | RNA 修饰芯片 | 修饰水平,不定位到单碱基 |
| 要看糖基化 RNA | GlycoRNA 整体检测 | 群体丰度与大小分布;另有芯片与测序两条路线 |
先定问题再定方法 —— 同一份 RNA 上,「有没有」和「在哪个位点、有多少」是两套答案。Garcia-Campos M A. et al., Cell 2019 · DOI 10.1016/j.cell.2019.06.013
03服务范围与交付
多数服务提供两种转录本范围 —— 只做 mRNA,或把 mRNA 与 lncRNA 放在同一次实验里分析;具体到每条方法,见对应页面的服务信息。
通用交付内容
- 原始测序数据(FASTQ),可直接提交 GEO/SRA 等公共数据库。
- 样本与测序质控报告,含比对文件与核心比对统计。
- 结果表(XLSX):位点或区段、坐标、宿主基因与修饰水平/富集。
- 分布图、motif 或富集图谱(PDF/PNG)。
- 差异分析表、功能富集报告与基因组浏览器轨道文件。
04常见问题
我该从哪条线开始?
先看问题要不要位点。要位点或比例,直接走单碱基;只是先看整体变化,可以先走 RIP 富集或芯片,再把候选放到单碱基路线上。
同一次实验能同时看 mRNA 与 lncRNA 吗?
多数方法可以。两条转录本范围在同一次实验里一起分析,不需要拆成两个项目。
样本类型有什么限制?
接受从细胞、组织、血液等来源提取的总 RNA,也接受培养细胞沉淀与冷冻组织样本;制备方式是否合适可以提前与技术支持确认。
多条路线能不能组合?
可以,而且经常是有必要的:富集或芯片负责缩小范围,单碱基路线负责定位与定量。能不能一次读多种修饰,取决于各方法的前处理是否兼容,需要按样本评估。
结果怎么和已有组学数据对齐?
结果表带基因组坐标与宿主基因,便于与转录组、翻译组或芯片结果对齐;具体组合方式可以按研究问题讨论。