服务优势
- 预处理解决逆转录障碍：采用 rtStar™ tRNA Pretreatment & First-Strand cDNA Synthesis Kit 去除甲基化修饰屏障，提高 cDNA 产出。
- 定量更一致：各条 tRNA 的逆转录效率接近，组间比较才不会因效率波动产生假差异。
- 适合少量靶标：只关注若干条 tRNA 时，比整批测序更经济，周期也更短。
- 结果可复核：对测序或芯片发现的差异分子做独立定量确认。
- 样本适配广：细胞、组织等常规样本类型均可开展。
背景介绍
tRNA-qPCR是一种针对单个 tRNA 靶标的实时荧光定量检测方法。样本先经去甲基化预处理，再进行逆转录与实时定量 PCR 扩增，通过标准曲线换算出各靶标的相对表达量，常用于验证测序或芯片结果。
tRNA 上的 m¹A、m³C、m¹G 等修饰会在逆转录阶段造成延伸终止或碱基错配，直接影响 cDNA 产量。如果不做预处理，不同 tRNA 的逆转录效率差异会被误读为表达差异——这是该检测中最容易出问题的一环。
与全谱检测相比，qPCR 的价值在于"验证"与"聚焦"：靶标明确、样本较多时，它比重复做全谱测序更划算。
i-tRAP 用去甲基化酶去除碱基修饰造成的逆转录阻碍，再以 PCR 的方式特异性地定量单个 tRNA 的氨酰化比例。 i-tRAP (individual tRNA acylation PCR): a convenient method for selective quantification of tRNA charging. RNA 2022;28(12). PMID: 36283829
实验流程
引物准备靶标特异引物
RNA 抽提样本核酸提取
去甲基化预处理去除修饰屏障
逆转录与扩增实时荧光定量
数据分析相对定量与统计
数据分析
按标准曲线换算各靶标的相对表达量，输出扩增曲线、熔解曲线与定量结果表。结果支持组间比较与统计检验，可直接用于图表制作。
研究应用
- 结果验证：对测序或芯片发现的差异 tRNA 做独立定量确认。
- 少量靶标定量：只关注若干条 tRNA 时更经济。
- 大样本队列：样本数量多、靶标数量少时效率最高。
- 时间序列实验：观察少数靶标在多个时间点的表达趋势。
- 与芯片互补：芯片做全谱筛选，qPCR 复核关键分子。
- 多平台组合：与 tRNA 测序、修饰检测组合使用。
常见问题
为什么 tRNA 做 qPCR 需要特殊预处理？
tRNA 上丰富的 m¹A、m³C、m¹G 等甲基化修饰会阻碍逆转录，导致 cDNA 产量低且不稳定。预处理用于去除这些修饰，使各条 tRNA 的逆转录效率更接近，定量结果才具备可比性。
qPCR 结果能和测序结果对上吗？
可以。两者测的都是相对表达量，趋势上应当保持一致。若出现个别不一致，通常与引物特异性或样本状态有关，可以一起排查原因。
适合什么规模的项目？
适合靶标明确、样本数量较多的场景，例如在大样本队列中验证少量候选 tRNA。若需要全谱信息，建议先用测序或芯片筛选，再用 qPCR 复核。
引物需要自己准备吗？
可以自备，也可以使用 rtStar™ Pre-designed tRNA Primer Sets——那是经过验证的成品引物，拆开即可使用，非特异性反应更少，适合不想花时间摸索条件的项目。
参考文献
- [1] i-tRAP (individual tRNA acylation PCR): a convenient method for selective quantification of tRNA charging. RNA 2022;28(12):1616-1629. DOI: 10.1261/rna.079323.122. PMID: 36283829