服务优势
- 四种修饰一次完成：同步给出 m¹A、m³C、m¹G 与 m2,2G 的位点与修饰水平，四类结果来自同一批数据，彼此可直接比较。
- 节省珍贵样本：不必为每种修饰分别建库，样本量有限时尤其有价值。
- 单碱基分辨率：以错配位点判定修饰位置，定位精度到单个核苷酸。
- 去甲基化处理：建库前清除已知修饰，减少不同类型信号之间的相互干扰。
- 与芯片互补：芯片适合已知靶标的快速定量，本服务提供位点级的整体刻画。
背景介绍
tRNA 多修饰测序是一种在一次实验中对多种甲基化修饰做位点级分析的方法。m¹A、m³C、m¹G 与 m2,2G 都会破坏碱基配对，在逆转录时造成错配；通过统计错配位点即可判定修饰位置并估算修饰水平。
多种修饰往往协同参与 tRNA 的结构维持与功能调控，只测其中一种难以看清整体格局。把四类修饰放在同一批数据里比较，更容易发现它们之间的关联。
对样本来源受限的课题来说，一次实验覆盖多种修饰也能减少材料消耗，避免因分次建库引入批次差异。
tRNA 是修饰最密集的 RNA，平均每个分子带约 13 个修饰；它的丰度、修饰与氨酰化水平共同参与 mRNA 解码，并随细胞类型与环境而变化。 Pan T. Cell Research 2018;28(4):395-404. PMID: 29463900
实验流程
样本质检RNA 完整性与纯度
去甲基化处理清除已知修饰
文库构建保留错配信号
高通量测序按项目规模配置
修饰判定错配识别与定量
生物信息分析
位点鉴定与定量
给出四类修饰各自的位点与修饰水平，并附成熟 tRNA 相对坐标、反密码子与结构域归属。
分布与差异分析
展示各修饰在 tRNA 上的分布特征，并比较组间差异，输出差异位点表与可视化结果。
多修饰联合呈现
把四类修饰放在同一视角下比较，便于观察它们在同一批样本中的协同或独立变化。
研究应用
- 多修饰格局：一次获得四类修饰的位点与水平，观察修饰之间的协同变化。
- 样本受限课题：珍贵样本或来源有限的材料，减少重复建库的消耗。
- 机制研究：结合修饰酶表达数据，分析修饰与酶之间的对应关系。
- 肿瘤与代谢方向：比较病理状态下的修饰格局改变。
- 与芯片互补：芯片做已知靶标定量，本服务做位点级整体刻画。
- 后续验证：从结果中挑选关键位点，再用单碱基方法或 qPCR 复核。
常见问题
四种修饰的检测原理相同吗？
它们共享同一条技术路线：这些甲基化修饰会破坏沃森-克里克配对，在逆转录时引发错配，通过识别错配位点判定修饰位置。同时配合去甲基化处理清除已知修饰，减少不同类型信号之间的相互干扰，再分别归因到四类修饰上。
和 small RNA 修饰芯片怎么选？
芯片适合已知靶标的稳定定量，样本量大、需要快速比较时更省事；测序给出位点级信息，可以发现新的修饰位置。若课题既需要覆盖面又需要验证，两个平台可以组合使用。
为什么要做去甲基化处理？
tRNA 上的修饰密度高，如果不做处理，多种修饰产生的信号会互相叠加，难以区分是哪一类修饰造成的错配。去甲基化处理用于把已知修饰先清除，使剩余信号更容易归因。
报告包含哪些内容？
包含原始测序数据、四类修饰各自的位点与水平数据表，以及分布与差异分析图表。位点表附带成熟 tRNA 相对坐标与结构域信息，便于结合结构位置解读结果。