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基因芯片技术服务 DNA甲基化芯片 DNA羟甲基化芯片 ChIP-chip |
NGS测序技术服务 DNA甲基化测序 DNA羟甲基化测序 染色质免疫共沉淀测序 |
PCR技术服务 MeDIP-qPCR hMeDIP-qPCR ChIP-qPCR |
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蛋白相对定量 TMT标记定量技术 非标定量技术 |
蛋白修饰 TMT标记定量磷酸化 非标定量磷酸化 |
RNA/蛋白-蛋白相互作用 RNA-蛋白相互作用 蛋白-蛋白相互作用 |
Exiqon miRCURY LNA™ Universal RT microRNA PCR芯片检测平台，基于LNA™专利技术，采用独特的Universal RT反应，实现对microRNA的准确定量检测，即使在总RNA含量较低的样本，如FFPE和血清/血浆中，也可以获得高质量的microRNA检测结果。
康成生物为您提供Exiqon公司miRCURY LNATMUniversal RT microRNA PCR芯片——microRNA实时定量PCR芯片技术服务，全部实验皆使用进口试剂完成，使用的定量PCR仪器为美国应用生物系统公司生产的荧光定量PCR仪ABI PRISM® 7700或ABI PRISM® 7900。PCR芯片技术服务的主要流程包括：RNA抽提、RNA质量检测、cDNA模板制备、实时定量PCR、数据处理及制作实验报告。
Exiqon miRCURY LNA™ Universal RT microRNA PCR芯片列表
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芯片名称
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规格
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物种
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描述
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|---|---|---|---|
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microRNA Ready-to-Use PCR, Human panel
I
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384 well
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人
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372个常见的人类miRNA
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microRNA Ready-to-Use PCR, Human panel
I+II
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384 well
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人
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752 个人类miRNA
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microRNA Ready-to-Use PCR, Mouse&Rat
panel I
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384 well
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小鼠，大鼠
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372个常见的小鼠/大鼠miRNA
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microRNA Ready-to-Use PCR, Mouse&Rat
panel I+II
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384 well
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小鼠，大鼠
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752 个小鼠/大鼠miRNA
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Cancer Focus microRNA PCR
Panel
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96 well
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人
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84个癌症相关的miRNA
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Serum/Plasma Focus microRNA PCR
Panel
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384 well
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人
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179个在血清、血浆样品中验证过的miRNA
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Stem Cell Focus microRNA PCR
Panel
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96 well
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人
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85个与胚胎干细胞或多能诱导干细胞相关的miRNA
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Exiqon的LNA™专利技术攻破MicroRNA PCR检测的两大难题
*LNA™化学修饰提高引物和靶标分子的结合力，提高检测灵敏度，解决microRNA引物设计的难点：microRNA长度仅22nt左右，相当于一条普通oligo引物的长度，而PCR扩增需要上下游两条引物，因此传统的microRNA 的PCR方法仅一条引物为microRNA特异性，另一条采用通用引物，检测的特异性降低。 此外，microRNA的GC含量分布范围广: 5%-95%，由于A :T配对碱基的结合力要低于G :C配对，此GC含量低于50%的microRNA,即使整条序列都被一条普通的oligo引物覆盖，该引物的Tm值参数仍然难以达到PCR检测的要求（55-63℃），这个部分的microRNA用普通引物是不能得到有效扩增。LNA™专利技术能解决microRNA研究的难点，包括PCR检测。每个LNA™修饰位点能够提高引物Tm值3-8℃，因此在相同的PCR反应条件下（引物的Tm 值 60℃左右），可以通过加入LNA™缩短引物的长度，使得上下游都为microRNA特异性引物，PCR的特异性得到双重保障。而且更为重要的是，GC含量低的microRNA的PCR问题也能迎刃而解，控制加入LNA™的比例(GC含量低的microRNA检测引物加入多个LNA™修饰的碱基)，使所有的microRNA都能得到有效的、均一的检测信号。
Exiqon miRCURY LNA™ Universal RT microRNA PCR芯片特点
4.质控严格：每个panel均包含6个内参和2组质控对照；基于SYBR green的PCR方法，还可以提供溶解曲线以判断扩增特异性（图4）
5.高重复性：简化实验步骤，减少技术误差，实验重复性好（图5）
2. 基于LNA™专利技术的PCR扩增反应：
实现引物Tm值均一，并同时保持microRNA扩增的高特异性和高灵敏度：
miRCURY LNA™ Universal RT microRNA PCR芯片中所使用的microRNA特异性的PCR引物（PCR扩增上下游引物）都经过LNA™优化，并且经过严格的验证，能有效区分序列只差一个碱基的microRNA，并能区别成熟microRNA和microRNA前体，从而保证对靶microRNA的特异性扩增；同时，显著降低背景信号，从而增强对低丰度microRNA的准确检测。
3. 严格的芯片内参照和质控设置：
miRCURY LNA™ Universal RT microRNA PCR芯片内设置了6个内参，包括：3个microRNA (hsa-miR-103, hsa-miR-191 and hsa-miR-423-5p)，3个小RNA (U6, SNORD38B and SNORD49A)。这些内参在大量实验结果和多种组织的microRNA表达分析中均呈现出稳定的表达水平，但研究者也需要根据组织或细胞的实际情况选择最合适的、稳定表达的内参分析试验结果。
同时，芯片内还设置了一个spike-in对照和一组3次重复的芯片间误差校正参照。
1. miRCURY LNA™ Universal RT microRNA PCR芯片在LCM微量样本microRNA表达检测中的应用：
由于miRCURY LNA™ Universal RT microRNA PCR 芯片要求的样本量较其他平台更少，对于LCM等微量样本尤其适用。（图7）
