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microRNA原位杂交及Northern检测探针及试剂盒

  • 描述
  • 产品特点
  • 技术流程
  • 配套产品

  •        丹麦Exiqon公司致力于microRNA研究领域，为研究者提供一套完整的microRNA研究体系。康成生物提供Exiqon芯片技术服务的同时，亦可为您定购miRCURY LNATM系列产品，包括Knockdown探针、Northern探针、原位杂交探针和实时定量PCR系列试剂。

    miRCURY LNA™ microRNA Knockdown探针
           对miRBase记录和注释的所有物种（包括脊椎动物，无脊椎动物，植物等）的microRNA，Exiqon均提供相应的LNA™ microRNA Knockdown探针；探针采用了LNA™锁核酸技术，序列特异性强，有效消除二级结构和避免探针自身退火；探针的生物稳定性好，细胞毒性小，适用于各种经典的转染方法；如果选择荧光标记（fluorescein）探针，还可以直接估计转染效率。

    miRUCRY LNA Knockdown探针标记类型
    knockdown probe, ready to label
    knockdown probe, 5’ or 3’ -amino labeled
    knockdown probe, 5’ or 3’-fluorescein labeled
     * 除针对特定microRNA的knockdown探针外，还可订购以上标记类型的knockdown对照探针。
     

    miRCURY LNA™ microRNA原位杂交探针    

           对miRBase记录和注释的所有物种（包括脊椎动物，无脊椎动物，植物等）的microRNA，Exiqon均提供相应的LNA™ microRNA 原位杂交（in situhybridization）探针；探针采用了LNA™锁核酸技术并进行了优化，序列特异性强，有效消除二级结构和避免探针自身退火；探针灵敏度高，特异性强，可检测低丰度的microRNA；探针标记方式灵活多样，可满足研究者的不同实验需要。

           如果对实验信噪比要求特别严格，例如需检测低丰度microRNA，还可采用5’ 和 3’ double DIG-labeled miRCURY LNA™ microRNA原位杂交探针，由于具有两个DIG标记，这种探针在同类产品具有最高的检测灵敏度。
     
    miRUCRY LNA原位杂交检测探针标记类型
    In situhybridization detection probe，ready to label
    In situhybridization detection probe，5’ or 3’-DIG labeled
    In situhybridization detection probe，5’ or 3’-amino labeled
    In situhybridization detection probe，5’ or 3’-biotin labeled
    In situhybridization detection probe，5’ or 3’-fluorescein labeled
    In situhybridization detection probe，3’ and 5’-DIG labeled
     * 除针对特定microRNA的原位杂交探针外，还可订购以上标记类型的原位杂交阳性、阴性对照探针。
     


    miRCURY LNA™ microRNA Northern杂交探针    

           对miRBase记录和注释的所有物种（包括脊椎动物，无脊椎动物，植物等）的microRNA，Exiqon均提供相应的LNA™ microRNA Northern杂交探针；探针采用了LNA™锁核酸技术并进行了优化，序列特异性强，灵敏度高，并有效消除了二级结构和探针自身退火的形成；采用LNA™ microRNA Northern杂交探针，样本总RNA最低只需2.5µg。

     
    miRUCRY LNA Northern杂交检测探针标记类型
    Northern blotting detection probe，ready to label
    Northern blotting detection probe，5’ or 3’-DIG labeled
    Northern blotting detection probe，5’ or 3’-amino labeled
    Northern blotting detection probe，5’ or 3’-biotin labeled
    Northern blotting detection probe，5’ or 3’-fluorescein labeled
     * 除针对特定microRNA的Northern检测探针外，还可订购以上标记类型的Northern阳性、阴性对照探针。
     


  • miRCURYTMLNA knockdown探针的主要优点

    • 反义抑制效率高
    • 特异性高
    • 细胞毒性小
    • 与标准的细胞转染方法兼容性好
    • 生物稳定性高

    抑制效率高
           miRCURYTMLNA knockdown探针有很强的抑制效果。标准浓度或者更低浓度的miRCURYTMLNA knockdown探针都能有效抑制miRNA（Fig.1）。
    Fig.1 miRCURY™ LNA Knockdown探针对microRNA显著的抑制效果
    miR报告载体携带了miR序列的互补区，能够显示miR的表达水平。对照则是不携带miR序列互补区的空载体（pMIR-no target）。将miR-报告基因（荧光素酶），pGL4.13-Renilla（用于做标准化）和针对特定has-mir的miRCURY™ LNA Knockdown探针，共同转入HeLa细胞中。用Dual-Glow™ Luciferase (Promega)进行表达水平的检测。miRCURY™ LNA Knockdown探针对特定has-mir的抑制作用达到了60%左右。
     
           与一些用于knockdown miRNA的标准方法相比，如普通DNA探针、基于2’-O-methyl化学修饰的探针，miRCURYTMLNA knockdown探针显示了很高的抑制效率（Fig.2）。
     
    Fig.2不同knockdown miRNA的几种方法比较
    该图显示的是pMIR-21荧光素酶报告基因与针对hsa-mir-21做knockdown不同来源的寡核苷酸探针共转的结果。ProductA和B都是普通DNA寡核苷酸探针，2’-OMe是基于2’-O-methyl化学修饰的探针，以及miRCURYTMLNA探针，NC为阴性对照探针。以上都是在MCF7细胞中共转60小时后测得的结果。
     
    特异性高
           如果探针与靶基因之间有一个碱基错配，抑制效果就会显著降低。我们的数据显示，当探针和靶基因之间有两个碱基错配时，探针的抑制效果就完全被削弱了（Fig.3）。这一点相当重要，因为在细胞中相关的miRs很可能序列极为相似，所以knockdown探针的特异性越高越好。
    Fig.3 miRCURYTMLNA knockdown探针的错配识别能力

    该图显示的是针对hsa-mir-21的完全配对knockdown探针和错配的knockdown探针的抑制能力。pMIR-21报告基因的上调倍数是不同程度的miRCURYTM LNA knockdown错配探针与对照相比得出的结果。实验所用的是Hela细胞，转染24小时后用Dual-Glow™ Luciferase检测报告基因的表达水平。


    miRCURYTM  原位杂交检测探针主要优点：

    •  高灵敏度，可以检测普通oligo探针检测不到的微量miRNAs。
    •  覆盖所有已知的miRNAs。
    •  高特异性，能够区分单碱基或2个碱基差异的miRNAs。
    •  适应多种标记方法，如DIG、生物素、荧光。
    •  提供完整的实验步骤。

     


                                               

    图 1、miRNA-122a是肝细胞特异表达的，本图用miRCURYTMmiRNA-122a检测探针对小鼠肝细胞miRNA-122a（红色）进行检测。DNA（蓝色）用DAPI标记。


                                               

    图2、用miRCURYTM miRNA-124a探针检测人脑颞侧皮质的miRNA-124a的表达水平。所用的标本为甲醛固定、石蜡包埋的切片。


    A.
    B.
    图3、小鼠海马中miR-138的原位杂交实验。
    A. 分别用含有30%，10%，0%LNA的miR-138探针以及scrambled miR-138LNA探针，与小鼠海马组织在60度下原位杂交。杂交信号显示为红色， DNA（蓝色）用DAPI标记。该照片为放大5倍时的分辨率。
    B. A图白色方框区域的进一步放大，更加清晰的显示杂交信号。该照片放大倍数为25倍。
  • miRCURYTM LNA knockdown探针转染技术流程：
    1. 将培养到完全融合的细胞用胰酶消化后，计数，按1.5×106个细胞/瓶接种，加入5ml D-MEM完全培养基；
    2. 培养1-2天至40-80％融合；
    3. 将2ug miRCURYTM Knockdown 探针（或者Knockdown探针与报告质粒共转染）与8ul PLUS reagent混合，室温孵育15分钟；
    4. 将12ul Lipofectamin 与125ul DMEM（不含血清、含抗生素和Glutamax）混合，加入孵育好的DNA-PLUS混合物，混匀；
    5. 吸掉培养皿中的培养基，用4ml DMEM（不含血清、含抗生素和Glutamax）洗两次；
    6. 将2ml DMEM（不含血清、含抗生素和Glutamax）加入到DNA/LipofectaminPLUS混合物中，混匀，迅速加入培养皿中，37℃、5％CO2培养箱中培养3小时；
    7.  吸掉培养基，用4ml DMEM（不含血清、含抗生素和Glutamax）洗两次，添加新鲜DMEM（含有血清、抗生素、Glutamax），37℃、5％CO2培养箱中继续培养；
    8. 培养的细胞即可用于后续生物实验。
     
    *Glutamax：L-谷氨酰胺的衍生物，较其更为稳定。
  • Exiqon公司microRNA LNA Knockdown探针产品列表:  
    Product Type Product No. Storage Temp

    miCURY LNA microRNA inhibitor

    miRCURY LNA microRNA inhibitor, 1 nmol (4100001-4104908)-000 -20℃
    miRCURY LNA microRNA inhibitor, 5 nmol (4100001-4104908)-001 -20℃
    miRCURY LNA microRNA inhibitor, 15 nmol (4100001-4104908)-002 -20℃
    miRCURY LNA microRNA inhibitor, 5 nmol, 5`-fluorescein labeled (4100001-4104908)-011 -20℃
    miRCURY LNA microRNA inhibitor, 5 nmol, 3`-fluorescein labeled (4100001-4104908)-021 -20℃
    miRCURY LNA Power microRNA inhibitor, 1 nmol (4100001-4104908)-100 -20℃
    miRCURY LNA Power microRNA inhibitor, 5 nmol (4100001-4104908)-101 -20℃
    miRCURY LNA Power microRNA inhibitor, 15 nmol (4100001-4104908)-102 -20℃
    miRCURY LNA Power microRNA inhibitor, 5 nmol, 5`-fluorescein labeled (4100001-4104908)-111 -20℃
    miRCURY LNA Power microRNA inhibitor, 5 nmol, 3`-fluorescein labeled (4100001-4104908)-121 -20℃

    miRCURY LNA inhibitor control
    miRCURY LNA microRNA inhibitor negative control A, 1 nmol 199006-000 -20℃
    miRCURY LNA microRNA inhibitor negative control A, 5 nmol 199006-001 -20℃
    miRCURY LNA microRNA inhibitor negative control A, 15 nmol 199006-002 -20℃
    miRCURY LNA microRNA inhibitor negative control A,  5nmol, 5`-fluorescein labeled 199006-011 -20℃
    miRCURY LNA microRNA inhibitor negative control A,  5nmol, 3`-fluorescein labeled 199006-021 -20℃
    miRCURY LNA microRNA inhibitor negative control B, 1 nmol 199007-000 -20℃
    miRCURY LNA microRNA inhibitor negative control B, 5 nmol 199007-001 -20℃
    miRCURY LNA microRNA inhibitor negative control B, 15 nmol 199007-002 -20℃
    miRCURY LNA microRNA inhibitor negative control B,  5nmol, 5`-fluorescein labeled 199007-011 -20℃
    miRCURY LNA microRNA inhibitor negative control B,  5nmol, 3`-fluorescein labeled 199007-021 -20℃
    miRCURY LNA microRNA Power inhibitor negative control A, 1 nmol 199006-100 -20℃
    miRCURY LNA microRNA Power inhibitor negative control A, 5 nmol 199006-101 -20℃
    miRCURY LNA microRNA Power inhibitor negative control A, 15 nmol 199006-102 -20℃
    miRCURY LNA microRNA Power inhibitor negative control A,  5nmol, 5`-fluorescein labeled 199006-111 -20℃
    miRCURY LNA microRNA Power inhibitor negative control A,  5nmol, 3`-fluorescein labeled 199006-121 -20℃
    miRCURY LNA microRNA Power inhibitor negative control B, 1 nmol 199007-100 -20℃
    miRCURY LNA microRNA Power inhibitor negative control B, 5 nmol 199007-101 -20℃
    miRCURY LNA microRNA Power inhibitor negative control B, 15 nmol 199007-102 -20℃
    miRCURY LNA microRNA Power inhibitor negative control B,  5nmol, 5`-fluorescein labeled 199007-111 -20℃
    miRCURY LNA microRNA Power inhibitor negative control B,  5nmol, 3`-fluorescein labeled 199007-121 -20℃

    预制的miRCURYTmmicroRNA 原位杂交检测探针
           预制的检测探针覆盖了The Well Trust Sanger Institue收录的所有miRNAs，包括无脊椎动物、脊椎动物和植物等。
    Product name Product No. Storage Temp
    miRCURY LNA™Detection probe, 1 nmol, ready to label 610000-689999-300 -20℃
    miRCURY LNA™Detection probe, 1 nmol, 5'-DIG labeled 610000-689999-340 -20℃
    miRCURY LNA™Detection probe, 1 nmol, 5'-biotin labeled 610000-689999-370 -20℃
    miRCURY LNA™Detection probe, 1 nmol, 5'-fluorescein labeled 610000-689999-310 -20℃
    miRCURY LNA™Detection probe, 1 nmol, 3'-DIG labeled 610000-689999-350 -20℃
    miRCURY LNA™Detection probe, 1 nmol, 5'-DIG and 3'-DIG labeled 610000-689999-360 -20℃
    miRCURY LNA™Detection probe, 1 nmol, 5'-fluorescein and 3'-fluorescein labeled 610000-689999-330 -20℃
     
    定制的miRCURYTMmicroRNA 原位杂交检测探针
           定制的检测探针是Exiqon根据客户自己选择的miRNA专门定制的。   
    Product name Product No. Storage Temp
    Custom miRCURY LNA™ Detection probe, 1 nmol, ready to label 699999-300 -20℃
    Custom miRCURY LNA™ Detection probe, 1 nmol, 5'-DIG labeled 699999-340 -20℃
    Custom miRCURY LNA™ Detection probe, 1 nmol, 5'-biotin labeled 699999-370 -20℃
    Custom miRCURY LNA™ Detection probe, 1 nmol, 5'-fluorescein labeled 699999-310 -20℃
    Custom miRCURY LNA™ Detection probe, 1 nmol, 5'-amino labeled 699999-390 -20℃
    Custom miRCURY LNA™ Detection probe, 1 nmol, 5'-TYE563 labeled 699999-330 -20℃
    Custom miRCURY LNA™ Detection probe, 1 nmol, 5'-TYE665 labeled 699999-360 -20℃
    Custom miRCURY LNA™ Detection probe, 1 nmol, 3'-DIG labeled 699999-350 -20℃
    Custom miRCURY LNA™ Detection probe, 1 nmol, 3'-biotin labeled 699999-380 -20℃
    Custom miRCURY LNA™ Detection probe, 1 nmol, 3'-fluorescein labeled 699999-320 -20℃
    Custom miRCURY LNA™ Detection probe, 1 nmol, 5'-DIG and 3'-DIG labeled 699998-341 -20℃
    Custom miRCURY LNA™ Detection probe, 1 nmol, 5'-biotin and 3'-biotin labeled 699998-371 -20℃
    Custom miRCURY LNA™ Detection probe, 1 nmol, 5'-fluorescein and 3'-fluorescein labeled 699998-311 -20℃
    Custom miRCURY LNA™ Detection probe, 1 nmol, 5'-fluorescein and 4'-fluorescein labeled 699998-391 -20℃
    Custom miRCURY LNA™ Detection probe, 1 nmol, 5'-fluorescein and 5'-fluorescein labeled 699998-331 -20℃
    Custom miRCURY LNA™ Detection probe, 1 nmol, 5'-fluorescein and 6'-fluorescein labeled 699998-361 -20℃
     
    miRCURY LNATMmicroRNA原位杂交优, , 化试剂盒（石蜡标本）
           原位杂交优化试剂盒（石蜡标本）包含进行microRNA原位杂交, 实验的所有关键试剂。包括两端地高辛标记检测探针，原位杂交缓冲液和配套, 试剂。储存条件：探针及蛋白酶K-20℃，杂交buffer4℃。 
    Product name Product No. description
    microRNA ISH Optimization Kit 1 (FFPE) 90001 Optimization Kit 1 (miR-1), controls, buffer and ProtK (400 slides)
    microRNA ISH Optimization Kit 2 (FFPE) 90002 Optimization Kit 2 (miR-21), controls, buffer and ProtK (400 slides)
    microRNA ISH Optimization Kit 3 (FFPE) 90003 Optimization Kit 3 (miR-122), controls, buffer and ProtK (400 slides)
    microRNA ISH Optimization Kit 4 (FFPE) 90004 Optimization Kit 4 (miR-124), controls, buffer and ProtK (400 slides)
    microRNA ISH Optimization Kit 5 (FFPE) 90005 Optimization Kit 5 (miR-126), controls, buffer and ProtK (400 slides)
    microRNA ISH Optimization Kit 6 (FFPE) 90006 Optimization Kit 6 (miR-143), controls, buffer and ProtK (400 slides)
    microRNA ISH Optimization Kit 7 (FFPE) 90007 Optimization Kit 7 (miR-145), controls, buffer and ProtK (400 slides)
    microRNA ISH Optimization Kit 8 (FFPE) 90008 Optimization Kit 8 (miR-205), controls, buffer and ProtK (400 slides)
    microRNA ISH Optimization Kit 9 (FFPE) 90009 Optimization Kit 8 (miR-223), controls, buffer and ProtK (400 slides)
    microRNA ISH Optimization Kit 10 (FFPE) 90010 controls, buffer and ProtK (400 slides)

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