TMT标记定量磷酸化

  • 简介
  • 实验流程
  • 案例展示
  • 样品要求
  •        蛋白质磷酸化是一种重要的翻译后修饰(PTM),它动态可逆的调控细胞中几乎任意一个生物学过程。磷酸化信号通路的失调是癌症等诸多疾病的标志性事件,同时蛋白激酶也是许多药物的主要作用靶点,因此具有极大的研究价值[2]。伴随着基于质谱的蛋白质组学技术和磷酸化多肽富集方法以及高通量定量技术的不断发展,磷酸化蛋白组学已经成为目前最为成熟的PTM研究方向。TiO2对磷酸化多肽具有很高的特异性,广泛运用于丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸(pSTY)的磷酸化富集研究;酪氨酸磷酸化(pY)丰度往往较低,TiO2富集后也较难检测,通常需要采用特异性抗体进行富集,或与TiO2串联富集。结合磷酸化富集技术的高效性与质谱技术的高通量,深入研究在各种生理病理条件下磷酸化蛋白组动态变化过程变得实际可行且意义重大。

    图1.定量磷酸化蛋白组技术原理和磷酸化信号调控的多种生物学过程[3]。

    Aksomics(原康成生物)提供标准的定量磷酸化蛋白质组学一站式服务,您只需提供保存完好的生物样品,Aksomics专业的技术服务团队为您完成从样品制备到数据分析全部过程,并且提供完整的分析报告。如果酪氨酸磷酸化是您的重点关注对象,我们还将提供pY深度富集和分析服务。

    参考文献

    1. Larance, M. & Lamond, A. I. Multidimensional proteomics for cell biology. Nature reviews. Molecular cell biology 16, 269-280, doi:10.1038/nrm3970 (2015). [PMID: 25857810].
    2. Macek, B., Mann, M. & Olsen, J. V. Global and site-specific quantitative phosphoproteomics: principles and applications. Annual review of pharmacology and toxicology 49, 199-221, doi:10.1146/annurev.pharmtox.011008.145606 (2009). [PMID: 18834307].
    3. Humphrey, S. J., James, D. E. & Mann, M. Protein Phosphorylation: A Major Switch Mechanism for Metabolic Regulation. Trends in endocrinology and metabolism: TEM 26, 676-687, doi:10.1016/j.tem.2015.09.013 (2015). [PMID: 26498855].

  •        为了研究吸烟与胰腺疾病间的生物化学机制,来自Harvard Medical School的科学家使用了两种nicotinic acetylcholine receptor (nAChR)配体:nicotine和α-bungarotoxin刺激pancreatic stellate细胞,并运用TMT磷酸化蛋白组学技术, 高通量分析磷酸化蛋白组变化。

           最终,发现了~16,000个磷酸化位点,其中nicotine和α-bungarotoxin组分别有132个和451个位点相对于对照组具有显著差异,许多发生显著改变的磷酸化位点与细胞核功能及转录事件有关。




  • 样品类型 样品要求*
    蛋白质提取物 浓度 >1μg/μl,蛋白质总量 >2mg
    细胞样品 细胞量 >1×107
    组织样品 动物、微生物组织湿重 >100mg

    注:*酪氨酸磷酸化需要更多的蛋白样品,详情请咨询Aksomics技术人员。