AGO APP seq/芯片

  • 简介
  • 技术优势
  • 实验原理和流程
  • 结果展示
  •             Argonaute (包含AGO1-4)蛋白是组成RISCs(RNA-induced silencing complex )复合物的主要成员。其经典功能是在细胞质中装载miRNA形成RISC复合物,通过序列互补配对结合靶基因mRNA 3’UTR,促进mRNA降解或蛋白翻译抑制。AGO蛋白-smallRNA的复合物可以分泌到体液中并稳定存在,作为潜在的疾病诊断的生物标志物。

               AGO APP(Affinity Purification by Peptides) smallRNA测序利用特异性结合AGO1-4蛋白的T6B-coupled GST beads富集结合AGO1-4的smallRNA,包括miRNA、tsRNA等,进行smallRNA测序筛选,从而获得结合AGO蛋白发挥调控功能的smallRNA。

    AGO APP smallRNA芯片服务利用特异性结合AGO1-4蛋白的T6B肽段偶联GST磁珠富集结合AGO蛋白的smallRNA,包括miRNA、tsRNA、Agotron等,进行smallRNA芯片筛选,从而获得结合AGO蛋白调控RNA稳定性和翻译的smallRNA。




    图1. 血浆外泌体之外结合AGO2稳定存在的miRNA[2]



  • u  AGO APP可同时富集AGO1/2/3/4蛋白结合的smallRNA进行检测;

    u  AGO APP使用的T6B-coupled beads与Ago亲和性高,且检测物种更广泛(从昆虫到人都可检测);

    u  AGO APP smallRNA芯片能检测miRNA、tsRNA、Agotron等多种smallRNA,覆盖范围广;

    u  芯片探针检测特异性高,操作简单,样本需求量少。

     

    参考文献:

    [1] Iwakawa HO, et al. Mol Cell. 2022. PMID: 34942118

    [2] Arroyo, Jason D et al. PNAS. 2011. PMID: 21383194

  • 实验原理

    AGO APP(Affinity Purification by Peptides) smallRNA芯片利用特异性结合AGO1-4蛋白的T6B-coupled GST beads富集结合AGO1-4的smallRNA[7],包括miRNA、tsRNA、Agotron等,进行AGO APP smallRNA芯片筛选,从而获得结合AGO蛋白发挥调控功能的smallRNA(对于AGO结合的蛋白也可同时进行质谱检测)。

    样本用量:细胞用量>2*10^7个;组织>50mg;血浆血清>2ml。

     

    实验流程

    1.细胞/组织裂解;

    2.AGO APP富集结合的smallRNA;

    3.SmallRNA 3’去磷酸化,DMSO变性,Cy3C标记;

    4.Arraystar smallRNA芯片杂交;

    5.扫描芯片,进行数据分析;

    6.提供结果报告。

  • 1.差异AGO APP富集的smallRNA注释信息表格

     

     

    2.差异AGO APP富集的smallRNA火山图、散点图、聚类图

         


    3.深入数据分析:smallRNA 靶基因预测及靶基因GO/pathway分析